Eluizione e rigenerazione

Quando il mezzo cromatografico è esaurito, deve essere eluito. Il principio di base è quello di desorbire il prodotto target mediante uno ione o un gruppo più attivo. Diversi assorbenti differiscono nella loro attività. Pertanto, è necessario selezionare un eluente adatto da cui eluire la proteina  mezzi per cromatografia .

Esistono circa tre modi per eluire la cromatografia a scambio ionico:
Uno è per l'eluizione simultanea. L'eluente è un acido diluito, si può usare una soluzione alcalina o salina e si può anche usare un solvente organico appropriato, in cui viene utilizzata principalmente la soluzione salina e la forma di dosaggio in base alla natura del prodotto target e del prodotto finale è selezionato. Poiché la sostanza da assorbire spesso non è una singola specie, la carica di ciascuna sostanza è diversa e la forza legante al mezzo è diversa. Anche se viene utilizzato lo stesso eluente, la sostanza facilmente sostituibile uscirà prima dal mezzo e la forza legante è forte. Dopo lo scarico del materiale, purché raccolto mediante frazionamento, è possibile separare varie sostanze fino ad ottenere un prodotto relativamente puro. Questo metodo viene spesso utilizzato per la separazione quando le prestazioni del prodotto target sono ben comprese o per la separazione di specie analitiche.

La seconda è un'eluizione graduale, cioè un'eluizione con diverse concentrazioni di soluzione salina. Mezzo di separazione Durante il processo di scambio-adsorbimento, vengono adsorbite diverse proteine. Se viene utilizzata una condizione di eluizione costante, a volte non è possibile separare correttamente tutti i componenti ed è necessario modificare le condizioni di eluizione. Può trattarsi di un cambiamento graduale, ovvero per l'eluizione in fasi vengono utilizzati eluenti diversi o eluenti con valori di pH diversi e si possono ottenere picchi di eluizione diversi in base alle diverse concentrazioni di eluenti e alle diverse acidità. Cioè, una concentrazione di sale può ottenere una proteina bersaglio e diverse concentrazioni di sale possono ottenere proteine ​​bersaglio diverse. Questo metodo di eluizione passo-passo è adatto per la separazione di proteine ​​di natura nota, soprattutto per la produzione su larga scala, facile da usare e facile da controllare.

Il terzo tipo è un'eluizione a gradiente continuo, ovvero la modifica della forza ionica o del pH dell'eluato secondo un certo cambiamento lineare (generalmente solo in un caso speciale utilizzando un metodo di eluizione che modifica il pH), nel processo di classificazione dell'eluente Nel processo, diverse proteine ​​vengono sostituite una per una per ottenere vari componenti proteici e, allo stesso tempo, le proteine ​​generalmente non vengono allineate. L'eluizione a gradiente è il metodo di eluizione più comunemente utilizzato nella cromatografia a scambio ionico ed è anche il metodo di eluizione con la capacità di eluizione più forte, adatto per l'eluizione di componenti simili con proprietà di carica simili.

Nel processo di eluizione è possibile utilizzare l'eluizione cocorrente o l'eluizione controcorrente. L'eluizione equicorrente è anche chiamata eluizione diretta, ovvero la direzione del flusso dell'eluente è la stessa della direzione del flusso del fluido di lavoro, mentre l'eluizione controcorrente è chiamata anche eluizione inversa. Per l'eluizione inversa, la direzione del flusso dell'eluente è opposta alla direzione del flusso del fluido di lavoro. Se il liquido di alimentazione viene scambiato e adsorbito dall'alto verso il basso attraverso la colonna di scambio, la concentrazione dell'adsorbato nello strato superiore della colonna di scambio è superiore a quella dello strato inferiore e il desorbimento inverso dell'eluato dalla colonna di scambio dal basso verso l'alto può raggiungere lo scopo dell'eluizione in modo più efficiente. Tuttavia, poiché l'operazione di eluizione inversa è molto più complicata dell'eluizione diretta, si basa principalmente sull'eluizione positiva.

La portata dell'eluente influisce anche sulla separazione della cromatografia a scambio ionico e la velocità di eluizione viene solitamente mantenuta costante. In generale, la risoluzione dell'eluizione lenta è migliore di quella dell'eluizione veloce, ma la velocità di eluizione è troppo lenta, il che causerà tempi di separazione lunghi, effetti collaterali come diffusione del campione, ampliamento del picco dello spettro e risoluzione ridotta, quindi dipende sulla situazione reale. Scegliere il tasso di eluizione appropriato. Se i picchi di eluizione sono relativamente concentrati in una determinata area da provocare una sovrapposizione, l'intervallo del gradiente deve essere opportunamente ridotto oppure la velocità di eluizione deve essere abbassata per aumentare la risoluzione. Se la risoluzione è buona, ma il picco di eluizione è troppo ampio, la velocità di eluizione deve essere aumentata in modo appropriato.