Soluzione tampone

Il pH è un fattore importante nel funzionamento della cromatografia a scambio ionico e la stabilizzazione e le modifiche del pH vengono solitamente ottenute con soluzioni tampone, quindi la scelta della soluzione tampone è un fattore importante che influenza la separazione.

Nella scelta di un tampone, il pH e la forza ionica sono due fattori chiave che influenzano non solo la separazione del prodotto target dalle impurità, ma anche la resa del prodotto. Il pH scelto dipende dal punto isoelettrico, dalla stabilità e dalla solubilità del prodotto target, non solo per rendere il materiale separato uno ione scambiabile, ma anche per mantenerne elevata l'attività. È inoltre necessario considerare il valore di pK dello scambiatore ionico.

Poiché il buffer stesso è caricato, è anche combinato con il  mezzo cromatografico a scambio ionico Questa combinazione causerà due tipi di interferenza: da un lato, la riduzione della concentrazione del tampone, riducendone così la capacità tampone; dall'altro, lo scambio con il mezzo di separazione, in competizione con la proteina per la capacità di scambio del mezzo. Pertanto, quando si utilizzano mezzi per cromatografia a scambio anionico, evitare l'uso di tamponi caricati negativamente come il fosfato. Quando si utilizzano mezzi per cromatografia a scambio cationico, evitare l'uso di tamponi caricati positivamente come il Tris.

A causa dei diversi tipi di mezzo di separazione, il processo iniziale è leggermente diverso. In circostanze normali, quando si utilizza un mezzo cromatografico a scambio anionico, il tampone iniziale è superiore al punto isoelettrico della proteina target di 0,5-1 pH; utilizzando uno strato a scambio cationico. Quando il mezzo viene analizzato, il tampone iniziale è inferiore al punto isoelettrico della proteina target di 0,5-1 pH.