Soluzione tampone

Il pH è un fattore importante nel funzionamento della cromatografia a scambio ionico e la stabilizzazione e le modifiche del pH vengono solitamente ottenute con i tamponi, quindi la scelta del tampone è un fattore importante che influenza la separazione.

Quando si seleziona un tampone, il pH e la forza ionica sono due fattori chiave che influenzano non solo la separazione del prodotto target dalle impurità, ma anche la resa del prodotto. Il pH scelto dipende dal punto isoelettrico, dalla stabilità e dalla solubilità del prodotto target, non solo per rendere il materiale separato uno ione scambiabile, ma anche per mantenere la sua elevata attività. Dovrebbe essere considerato anche il valore pK dello scambiatore ionico.

Poiché il buffer stesso viene caricato, viene anche combinato con il file  mezzo per cromatografia a scambio ionico . Questa combinazione causerà due tipi di interferenza, da un lato, riducendo la concentrazione del tampone, riducendo così la capacità tampone; viene invece scambiata con il mezzo di separazione per competere con la proteina per la capacità di scambio del mezzo. Pertanto, quando si utilizzano mezzi cromatografici a scambio anionico, evitare l'uso di tamponi caricati negativamente come i fosfati. Quando si utilizzano mezzi per cromatografia a scambio cationico, evitare l'uso di tamponi caricati positivamente come Tris.

A causa dei diversi tipi di mezzi di separazione, il processo iniziale è leggermente diverso. In circostanze normali, quando si utilizzano mezzi cromatografici a scambio anionico, il tampone iniziale è superiore al punto isoelettrico della proteina bersaglio di 0,5-1 pH; utilizzando uno strato di scambio cationico Quando il mezzo viene analizzato, il tampone iniziale è inferiore al punto isoelettrico della proteina target di un valore compreso tra 0,5 e 1 pH.