Ni Seplife ®Resina per cromatografia di agarosio chelante al nichel 6FF (NTA).

Resina per cromatografia di agarosio chelante al nichel

Ni Seplife 6FF (NTA)

Ni Seplife ® Resina per cromatografia di agarosio chelante al nichel 6FF (NTA) Profilo del prodotto:

Cromatografia di agarosio chelante con Ni  (NTA) lega l'acido imminodiacetico sul terreno di agarosio 6FF e quindi chela lo ione Ni2+ formandolo come un  mezzi cromatografici di affinità . È ampiamente utilizzato per  elaborazione delle proteine ,  acido nucleico  E  purificazione dei polipeptidi  a valle di  biofarmaceutica e bioingegneria .

Ni Seplife ® Parametri della resina della resina per cromatografia di agarosio chelante al nichel 6FF (NTA):

Ni Seplife ® Istruzioni per il test della resina cromatografica di agarosio chelante al nichel 6FF (NTA):

1.Imballaggio della colonna
Tutto il materiale e il reagente a temperatura ambiente, preparando il tampone iniziale e l'eluizione migliore.
2.Equilibrio
Bilanciare con 2~5 volumi di letto di soluzione tampone iniziale fino a quando la conduttività, il pH e gli altri parametri non rimangono invariati.
3.Caricamento del campione
(1)Il campione viene generalmente disciolto nel tampone iniziale di pH 6-8 e l'aumento del pH del tampone di caricamento può aumentare il caricamento.
(2)Il tampone non deve contenere EDTA e citrato ed è meglio evitare agenti riducenti come mercaptoetanolo e DTT.
(3)La soluzione tampone comunemente utilizzata contiene da 10 a 100 mmol/L di soluzione tampone di fosfato di sodio, da 20 a 200 mmol/LTris-HCl di soluzione tampone.
(4) Al tampone vengono generalmente aggiunti da 0,15 a 0,5 mol/L di NaCl per eliminare lo scambio ionico.
(5)Quando si utilizza un gel di agarosio chelato di nichel per la prima volta, si consiglia di utilizzare 50 mmol/L di PBS (50 mmol/L NaH2PO4, 0,5 mol/L NaCl, pH 7,4) come tampone iniziale.
4.Eluizione
L'eluizione è generalmente suddivisa nei seguenti metodi:
(1)Ridurre l'eluizione del pH: la maggior parte delle proteine ​​verrà eluita a pH 6-4 (anche a pH 3-4) e il tampone può essere un sistema tampone di acetato di sodio, acido citrico e fosfato.
(2) Eluizione competitiva: aumento lineare o aumento della concentrazione di sostanze concorrenti con affinità per gli ioni metallici (ad esempio 0-0,5 mol/L imidazolo, 0-50 mmol/L istidina, 0-2 mol/L NH4Cl).
(3) Eluizione dell'agente chelante: agenti chelanti come EDTA ed EGTA possono reagire con ioni metallici per provocare l'eluizione della proteina. Tuttavia, questo metodo non può separare proteine ​​diverse e influisce sull'adsorbimento delle proteine, con conseguente incapacità della proteina di fusione di bloccarsi.
Osservazioni:
(1)Quando si utilizza per la prima volta, se la concentrazione di imidazolo richiesta per l'eluizione non è certa, si consiglia di aggiungere 10 mmol/L, 20 mmol/L, 50 mmol/L, 100 mmol/L, 200 mmol/L, 500 mmol/L a il buffer iniziale. L'imidazolo è stato eluito e raccolto rispettivamente dal basso verso l'alto e i risultati eluiti sono stati identificati mediante elettroforesi SDS-PAGE.
(2) L'imidazolo è alcalino e il pH viene regolato con HCl dopo aver preparato il tampone corrispondente.
(3) L'abbassamento dell'eluizione del pH e l'eluizione dell'agente chelante causeranno la caduta degli ioni metallici e gli ioni metallici dovranno essere richelati prima dell'uso successivo.
(4)Condizionalmente, è possibile eseguire un'eluizione lineare in gradiente di imidazolo per determinare le condizioni di eluizione preferite.
Per i metodi di eluizione sopra indicati, è necessario aggiungere al tampone da 150 a 500 mmol/L di NaCl per eliminare lo scambio ionico.
5.Rigenerazione
(1)Il gel deve essere denickato e rigenerato dopo un uso ripetuto o quando è necessario sostituire gli ioni metallici chelati. Metodo di rimozione del nichel: innanzitutto sciacquare la colonna con 5-10 volumi di letto di acqua distillata, quindi sciacquare la colonna con 5-10 volumi di letto di 100 mmol/L EDTA e infine utilizzare 2-3 volumi di letto di 0,5 mol/L NaCl lavaggi eliminare l'EDTA residuo.
(2)La colonna utilizzata più volte generalmente deve essere pulita dopo la rimozione del nichel. Metodo di pulizia: invertire la colonna con 0,1~1,0 mol/L NaOH, mantenerla a 50 cm/h per 1~2 h, non solo può rimuovere le impurità forti, ma rimuove anche la fonte di calore.
(3)Richelazione degli ioni metallici dopo la pulizia. Metodo di chelazione: in primo luogo, la colonna dopo la rimozione del nichel viene completamente equilibrata con 2-5 volumi di letto di acqua distillata, quindi viene utilizzata una soluzione di sale metallico da 0,1 a 0,3 mol/L per far passare da 5 a 10 volumi di letto per chelare gli ioni metallici. Sciacquare con 5-10 volumi di letto di acqua distillata per rimuovere gli ioni metallici non chelati.
6.CIP
(1)Rimozione delle proteine ​​adsorbite mediante scambio ionico: da 2 a 3 volumi del letto sono stati lavati con una soluzione di NaCl da 2 mol/L.
(2) Rimozione di proteine ​​e lipidi fortemente idrofobici, ecc.: 4 volumi del letto sono stati lavati nuovamente con etanolo al 70% o isopropanolo al 30%.
(3) Rimozione della proteina precipitata, proteina idrofoba: fase di rigenerazione del gel di riferimento.
7. Conservazione
Sigillato e conservato a 4~30°C (20% di etanolo nella soluzione di conservazione), asciutto, ventilato, pulito, non congelato; le colonne usate vengono conservate in una soluzione di etanolo al 20% a 4~8°C.

Attenzione:
(1)Il campione e Ni seplife ®6FF (NTA) deve essere equilibrato con il tampone di eluizione e quindi inviato alla colonna cromatografica.
(2)Il letto della colonna deve essere piatto, privo di scanalature e bolle d'aria, altrimenti deve essere reinstallato.
(3) Durante l'utilizzo, assicurarsi che la temperatura della colonna e del tampone siano le stesse, evitando la generazione di bolle nel letto della colonna e influenzando l'effetto di purificazione.
(4) La portata deve essere controllata rigorosamente durante il processo di eluizione e non troppo veloce.
(5)Durante il caricamento e l'intero processo di eluizione, viene impedita l'essiccazione della superficie del cilindro.