Nuove resine Oligo dT per la purificazione e l'isolamento dell'mRNA: esplorazione di una nuova tecnologia basata su sfere magnetiche seminate e resine stirene/DVB a getto

La nuova resina di affinità Sunresin Seplife®Oligo dT è progettata per la purificazione e l'isolamento dell'mRNA dai processi di produzione della trascrizione in vitro (IVT). Utilizzando i 20 anni di esperienza di Sunresin nella produzione di resine speciali, abbiamo progettato una tecnologia unica che produce una resina polimerica da 50 micron con dimensioni delle particelle molto uniformi mediante rigonfiamento dei semi. La resina è una resina di polistirene divinilbenzene reticolata funzionalizzata con oligo dT20. La resina cattura efficacemente l'mRNA dai componenti del processo di reazione di trascrizione, come enzimi e DNA plasmidico.

Seplife® Oligo dT è stato progettato per soddisfare la crescente domanda di selettività, capacità e purificazione a valle su larga scala di una gamma di costrutti di mRNA utilizzati nei vaccini, come il vaccino mRNA per il COVID-19, i vaccini oncologici, i vaccini contro l'AIDS, il trattamento e la prevenzione di malattie rare malattie e altre malattie gravi. Questa resina consente di catturare selettivamente l'mRNA attraverso la coda poliadenilata (poliA) utilizzando semplici passaggi di purificazione a base di sale (0,5 M NaCl) e acqua.

Le caratteristiche principali di Oligo dT combinano una facile purificazione dell'mRNA dalla miscela di trascrizione grezza per rimuovere efficacemente il DNA plasmidico e altri componenti IVT, un flusso di lavoro semplificato grazie al facile adattamento a diversi tipi di colonne e un'eccellente scalabilità. Naturalmente, la resina è stata progettata per mostrare un'eccellente stabilità a temperature fino a 65°C e agli alcali per un CIP efficiente.

L'esclusiva tecnologia della resina sviluppata da Sunresin consente di produrre lotti di resina da 50 kg, diminuendo così il rischio di variabilità e le migliori capacità di produzione della categoria utilizzando condizioni GMP e severi controlli di qualità.

La superficie delle microsfere di resina viene modificata, utilizzando una tecnologia proprietaria, per diventare più idrofila al fine di ridurre l'adsorbimento non specifico. Ciò si ottiene mediante l'aggiunta di un ligando costituito da un lungo braccio distanziatore a catena, in modo da ridurre l'impedimento sterico, aumentare la velocità di trasferimento di massa e garantire un legame altamente dinamico. La superficie delle sfere viene quindi funzionalizzata con poli(dT) per consentire la cattura dell'mRNA tramite accoppiamento di basi con la coda poliA dell'mRNA.

In questo poster presentiamo applicazioni nella purificazione dell'mRNA 1200nt utilizzando Oligo dT utilizzando la cattura e il rilascio in condizioni di purificazione dell'mRNA standard. Inoltre, il rivestimento eseguito sulla resina consente la riduzione del DNA plasmidico e di altri componenti della miscela di trascrizione.

Presentiamo anche le resine magnetiche di nuova concezione funzionalizzate con oligo dT per una facile purificazione e separazione nelle fasi di sviluppo di ricerca e sviluppo. Queste sfere magnetiche partono da un nucleo di resina di polistirene divinilbenzene realizzato mediante una tecnologia di semina unica che consente di realizzare sfere monodimensionate da 1 a 3 micron. Queste sfere vengono quindi rivestite con Fe3O4 e quindi completamente rivestite con un guscio di poliuretano che protegge completamente le sfere dal rilascio del materiale paramagnetico.

Queste particelle magnetiche consentono una separazione facile e veloce dell'mRNA, migliorando così il processo di sviluppo e screening di nuove terapie geniche.