Resina cromatografica di agarosio chelante in nichel
Istruzioni Ni Seplife 6FF (IDA)
NI Seplife® 6FF (IDA) Profilo del prodotto cristofino di affinità:
Cromatografia di agarosio chelante Ni (IDA) è legante l'acido iminodiacetico su terreni di agarosio 6F e quindi chelatura di ioni di Ni2+ essere come un Affinità Media cromatografica. È ampiamente usato per il elaborazione delle proteine, acido nucleico E Purificazione polipeptidica nel flusso down di biofarming e bioingegneria.
Ni Seplife® 6FF (IDA) Affinità Cromatografiche Media Resina Parametri:
| Codice in resina | NI Seplife® 6FF (IDA) |
| Aspetto | Sfere gel perle |
| Dimensione delle particelle (μm) | 45 ～ 165 |
| Matrice | Seplife 6ff |
| Portata (cm/h) | ≥370 |
| Pressione (MPA) | 0.3 |
| Capacità di legame degli ioni | (Ni2+ Umol/ml): ~ 15 |
| Riferimento di flusso lineare | 60 cm/h |
| stabilità del pH | 3 ~ 13 (lungo termine), 2 ~ 14 (breve termine, CIP) |
| Applicazione | Purificazione delle proteine del suo tag |
| Stabilità chimica | Stabile in soluzione tampone d'acqua, 0,1mol/l NaOH; 0,01mol/L HCl;
8 mol/L Carbamide |
Ni Seplife® 6FF (IDA) Affinity Chromatographic Media Test Istruction:
1.Column Packing
(1) tutto il materiale e il reagente a temperatura ambiente, preparando il tampone iniziale e l'eluizione Beffer.
(2) Prendi il campione di resina secondo la dimensione della colonna, lavare il 20% di etanolo per asciugare, utilizzare il tampone (il rapporto tra resina: tampone = 3: 1) per trasformare il trattamento con omogenato e degassante.
;
(4) Utilizzare l'asta di vetro per guidare l'omogenato nella colonna insieme alla faccia interna della colonna una volta per evitare qualsiasi bolla. Apri la valvola di uscita della colonna per rendere libera la resina e collegare bene il tappo superiore della colonna.
(5) Aprire la pompa peristaltica, utilizzare il tampone per passare attraverso la colonna alla portata di 1,33 volte rispetto alla portata del tampone normale usando. Utilizzare il buffer da 2-3bv per effettuare il bilanciamento della colonna.
2. Equilibrio
Equilibrio con 2 ~ 5 letti di volumi di soluzione tampone iniziale fino a quando la conducibilità, il pH e altri parametri non sono invariati.
3. Caricamento del campione
(1) Il campione viene generalmente sciolto nel tampone iniziale di pH 6-8 e l'aumento del pH del tampone di carico può aumentare il carico.
(2) Il tampone non deve contenere EDTA e citrato ed è meglio evitare di ridurre gli agenti come il mercaptoetanolo e il DTT.
(3) La soluzione tampone comunemente utilizzata ha una soluzione tampone fosfato di sodio da 10 a 100 mmol/L, soluzione tampone da 20 a 200 mmol/LTRIS-HCl.
(4) da 0,15 a 0,5 mol/L di NaCl viene generalmente aggiunto al tampone per eliminare lo scambio ionico.
(5) Quando si utilizza un gel di agarosio chelato di nichel per la prima volta, si consiglia di utilizzare 50 mmol/L PBS (50 mmol/L Nah2PO4, NaCl 0,5 mol/L, pH 7,4) come tampone iniziale.
4. Eluizione
L'eluizione è generalmente divisa nei seguenti metodi:
(1) Ridurre l'eluizione del pH: la maggior parte delle proteine verrà eluita a pH 6-4 (anche a pH 3-4) e il tampone può essere sistemi di tampone acetato di sodio, acido citrico e fosfato.
(2) Eluizione competitiva: aumento o aumentando linearmente la concentrazione di sostanze concorrenti con affinità con ioni metallici (ad es. 0-0,5 mol/L imidazolo, 0-50 mmol/L istidina, 0-2 mol/L NH4Cl).
(3) Eluizione degli agenti chelanti: agenti chelanti come EDTA ed EGTA possono reagire con ioni metallici per causare l'eluta della proteina. Tuttavia, questo metodo non può separare diverse proteine e influisce sull'adsorbimento delle proteine, con conseguente incapacità della proteina di fusione.
Ni Seplife® 6FF (IDA) Affinità Cromatografiche Media Osservazioni:
(1) Quando si utilizza per la prima volta, se la concentrazione di imidazolo richiesto per l'eluizione è incerta, si consiglia di aggiungere 10 mmol/L, 20mol/L, 50mol/L, 100 mmol/L, 200mol/L, 500mol/L a il buffer iniziale. L'imidazolo è stato eluito e raccolto da basso a alto, rispettivamente e i risultati eluiti sono stati identificati dall'elettroforesi SDS-PAGE.
(2) L'imidazolo è alcalino e il pH viene regolato con HCl dopo che il tampone corrispondente è preparato.
(3) Abbassare l'eluizione del pH ed eluire l'agente chelante causerà la caduta degli ioni metallici e gli ioni metallici devono essere rielaborati prima dell'uso successivo.
(4) Condizionalmente, è possibile eseguire un'eluizione lineare del gradiente di imidazolo per determinare le condizioni di eluizione preferite.
Per i suddetti metodi di eluizione, da 150 a 500 mmol/L di NaCl devono essere aggiunti al tampone per eliminare lo scambio di ioni.
5. Regenerazione
(1) Il gel deve essere denick e rigenerato dopo un uso ripetuto o quando è necessario sostituire gli ioni metallici chelati. Metodo di rimozione del nichel: sciacquare in primo luogo la colonna con volumi da 5 a 10 letti di acqua distillata, quindi sciacquare la colonna con volumi da 5 a 10 letti di 100 mmol/ L EDTA e infine utilizzare volumi da 2 a 3 letti di NaCl 0,5 mol/ L via residuo EDTA.
(2) La colonna utilizzata per più volte deve essere generalmente pulita dopo la rimozione del nichel. Metodo di pulizia: invertire la colonna con 0,1 ~ 1,0 mol/L NaOH, mantienila a 50 cm/h per 1 ~ 2 h, non solo può rimuovere le forti impurità, ma anche rimuovere la fonte di calore.
(3) Ri-chela ioni metallici dopo la pulizia. Metodo di chelazione: in primo luogo, la colonna dopo la rimozione del nichel è completamente equilibrata con volumi da 2 a 5 letti di acqua distillata, quindi viene utilizzata una soluzione di sale metallica da 0,1 a 0,3 mol/L per passare da 5 a 10 letti per ioni metallici chelati. Risciacquare con volumi da 5 a 10 letti di acqua distillata per rimuovere gli ioni metallici non ridimensionati.
6.Cip
(1) Rimozione di proteine adsorbite mediante scambio ionico: i volumi da 2 a 3 letti sono stati lavati indietro con una soluzione di NaCl 2 mol/L.
(2) Rimozione di forti proteine idrofobiche e lipidi, ecc.: Volumi a 4 letti sono stati lavati indietro con etanolo al 70% o al 30% di isopropanolo.
(3) Rimozione della proteina precipitata, proteina idrofobica: fase di rigenerazione del gel di riferimento.
7.Storage
Sigillato e conservato a 4 ~ 30 ° C (20% di etanolo in soluzione di stoccaggio), asciutto, ventilato, pulito, non congelato; Le colonne usate sono immagazzinate in una soluzione di etanolo 4 ~ 8 ° C, 20%.
Attenzione:
(1) Il campione e Ni seplife®6ff (IDA) devono essere equilibrato con il tampone di eluizione E poi vai alla colonna di cromatografia.
(2) Il letto della colonna deve essere piatto, privo di scanalature e bolle d'aria, altrimenti dovrebbe essere reinstallato.
(3) Quando si utilizza, assicurarsi che la temperatura della colonna e il tampone siano uguali, evitando la generazione di bolle nel letto della colonna e influenzando l'effetto di purificazione.
(4) La portata dovrebbe essere strettamente controllata durante il processo di eluizione e non troppo veloce.
(5) Durante il carico e l'intero processo di eluizione, la superficie del cilindro viene impedito di asciugare.
Français
Sunresin Park, No.135, jinye Road, Xi'an Hi-tech Industrial Development Zone, Shaanxi-710076, Cina 
Mandaci una email:
Chiamaci al: