Ni Seplife ®Resina cromatografica di agarosio chelante al nichel 6FF (NTA)

Resina cromatografica di agarosio chelante al nichel

Ni Seplife 6FF (NTA)

Ni Seplife ® Resina cromatografica di agarosio chelante al nichel 6FF (NTA) Profilo del prodotto:

Cromatografia di agarosio chelante Ni  (NTA) lega l'acido iminodiacetico sul terreno di coltura dell'agarosio 6FF e quindi chela lo ione Ni2+ per essere come un  mezzi cromatografici di affinità . È ampiamente utilizzato per la  elaborazione delle proteine ,  acido nucleico  E  purificazione del polipeptide  a valle di  biofarmaceutica e bioingegneria .

Ni Seplife ® 6FF (NTA) Resina cromatografica di agarosio chelante al nichel Parametri della resina:

Ni Seplife ® Istruzioni per il test della resina cromatografica di agarosio chelante al nichel 6FF (NTA):

1.Imballaggio a colonna
Tutto il materiale e il reagente a temperatura ambiente, prima di preparare il tampone iniziale e l'eluizione.
2. Equilibrio
Bilanciare con 2~5 volumi di letto di soluzione tampone iniziale fino a quando la conduttività, il pH e gli altri parametri rimangono invariati.
3. Caricamento del campione
(1) Il campione è generalmente disciolto nel tampone iniziale con pH 6-8 e l'aumento del pH del tampone di caricamento può aumentare il caricamento.
(2) Il tampone non deve contenere EDTA e citrato ed è meglio evitare agenti riducenti come mercaptoetanolo e DTT.
(3)La soluzione tampone comunemente utilizzata contiene una soluzione tampone di fosfato di sodio da 10 a 100 mmol/L e una soluzione tampone di Tris-HCl da 20 a 200 mmol/L.
(4)In genere, al tampone vengono aggiunti da 0,15 a 0,5 mol/L di NaCl per eliminare lo scambio ionico.
(5)Quando si utilizza per la prima volta un gel di agarosio chelato di nichel, si consiglia di utilizzare 50 mmol/L PBS (50 mmol/L NaH2PO4, 0,5 mol/L NaCl, pH 7,4) come tampone iniziale.
4.Eluizione
L'eluizione è generalmente suddivisa nei seguenti metodi:
(1) Ridurre l'eluizione del pH: la maggior parte delle proteine ​​verrà eluita a pH 6-4 (anche a pH 3-4) e il tampone può essere costituito da sistemi tampone acetato di sodio, acido citrico e fosfato.
(2)Eluizione competitiva: aumento lineare o incremento della concentrazione di sostanze concorrenti con affinità per gli ioni metallici (ad esempio 0-0,5 mol/L imidazolo, 0-50 mmol/L istidina, 0-2 mol/L NH4Cl).
(3) Eluizione dell'agente chelante: agenti chelanti come EDTA ed EGTA possono reagire con gli ioni metallici causando l'eluizione della proteina. Tuttavia, questo metodo non riesce a separare proteine ​​diverse e ne compromette l'adsorbimento, impedendo alla proteina di fusione di aderire.
Osservazioni:
(1) Al primo utilizzo, se la concentrazione di imidazolo necessaria per l'eluizione non è certa, si raccomanda di aggiungere 10 mmol/L, 20 mmol/L, 50 mmol/L, 100 mmol/L, 200 mmol/L e 500 mmol/L al tampone iniziale. L'imidazolo è stato eluito e raccolto, rispettivamente, da una concentrazione bassa ad una concentrazione alta, e i risultati eluiti sono stati identificati mediante elettroforesi SDS-PAGE.
(2) L'imidazolo è alcalino e il pH viene regolato con HCl dopo aver preparato il tampone corrispondente.
(3) L'abbassamento del pH dell'eluizione e l'eluizione dell'agente chelante causeranno la caduta degli ioni metallici, che dovranno essere nuovamente chelati prima del successivo utilizzo.
(4)Condizionalmente, è possibile eseguire un'eluizione lineare del gradiente di imidazolo per determinare le condizioni di eluizione preferite.
Per i metodi di eluizione sopra descritti, è necessario aggiungere al tampone da 150 a 500 mmol/L di NaCl per eliminare lo scambio ionico.
5.Rigenerazione
(1) Il gel deve essere rimosso e rigenerato dopo un uso ripetuto o quando è necessario sostituire gli ioni metallici chelati. Metodo di rimozione del nichel: lavare innanzitutto la colonna con 5-10 volumi di letto di acqua distillata, quindi lavare la colonna con 5-10 volumi di letto di EDTA 100 mmol/L e infine utilizzare 2-3 volumi di letto di NaCl 0,5 mol/L per rimuovere l'EDTA residuo.
(2) La colonna utilizzata più volte deve generalmente essere pulita dopo la rimozione del nichel. Metodo di pulizia: invertire la colonna con 0,1~1,0 mol/L di NaOH, mantenendola a 50 cm³/h per 1~2 ore, in modo da rimuovere non solo le impurità più resistenti, ma anche la fonte di calore.
(3) Rinchelazione degli ioni metallici dopo la pulizia. Metodo di chelazione: in primo luogo, dopo la rimozione del nichel, la colonna viene completamente equilibrata con 2-5 volumi di letto di acqua distillata, quindi si utilizza una soluzione di sale metallico da 0,1 a 0,3 mol/L per far passare 5-10 volumi di letto per chelare gli ioni metallici. Risciacquare con 5-10 volumi di letto di acqua distillata per rimuovere gli ioni metallici non chelati.
6.CIP
(1)Rimozione delle proteine ​​adsorbite mediante scambio ionico: da 2 a 3 volumi del letto sono stati lavati con una soluzione di NaCl 2 mol/L.
(2)Rimozione di proteine ​​e lipidi fortemente idrofobici, ecc.: 4 volumi del letto sono stati lavati con etanolo al 70% o isopropanolo al 30%.
(3)Rimozione della proteina precipitata, proteina idrofobica: fase di rigenerazione del gel di riferimento.
7. Conservazione
Sigillate e conservate a 4~30°C (soluzione di conservazione con etanolo al 20%), asciutte, ventilate, pulite e non congelate; le colonne usate vengono conservate a 4~8°C in una soluzione di etanolo al 20%.

Attenzione:
(1) Il campione e la seplife di Ni ®6FF (NTA) deve essere equilibrato con il tampone di eluizione e poi inviato alla colonna cromatografica.
(2) Il letto della colonna deve essere piano, privo di scanalature e bolle d'aria, altrimenti deve essere reinstallato.
(3) Durante l'uso, assicurarsi che la temperatura della colonna e del tampone siano le stesse, evitando la generazione di bolle nel letto della colonna e compromettendo l'effetto di purificazione.
(4) La portata deve essere rigorosamente controllata durante il processo di eluizione e non deve essere troppo veloce.
(5)Durante il caricamento e l'intero processo di eluizione, si impedisce che la superficie del cilindro si asciughi.